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So funktioniert die digitale PCR
So funktioniert die digitale PCR
Anonim

Es gibt so viel zu wissen, wenn man über alles spricht, was mit der digitalen Polymerase-Reaktion zu tun hat. Die digitale PCR wird in der klinischen Biologie oft als kritisch im Laborumfeld eingesetzt. Sie hat viele Vorteile im Vergleich zur quantitativen PCR, die viele Facetten von Probentestanwendungen umfasst.

Die PCR-Erfindung reicht bis in die 1980er Jahre zurück, und seitdem war der Nachweis von mikrobiologischen Wirkstoffen nie einfacher. Die fortschrittliche mikrobiologische Forschung wird seit langem von dieser Technologie angeführt und ist damit das beste Werkzeug, um im klinischen Bereich voranzukommen.

PCR ist heute in fast jedem klinischen Labor weltweit mit speziellen Instrumenten verfügbar, um die Funktionen umfassend zu erleichtern. Die digitale Polymerase-Kettenreaktion mag komplex erscheinen, und das ist sie auch, aber sie zerlegt sie in die verschiedenen Abschnitte, die sie zu dem gemacht haben, was sie ist.

So funktioniert die digitale PCR

Das Verständnis der Funktionsweise der dPCR ist für alle klinischen Mitarbeiter, die sie in ihrer mikrobiologischen Laufbahn anwenden müssen, von entscheidender Bedeutung. Beide Methoden der qPCR und dPCR gelten für die Betrachtung der während des Prozesses ablaufenden chemischen Reaktion.

dPCR ist bereits dafür bekannt, viele Vorteile in Bezug auf verbesserte Ergebnisse zu haben. Die Anwendung von Systemen, die unter anderem hochempfindlich sind und eine hochgenaue Quantifizierung erfordern, hat sich durch den Einsatz von dPCR-Methoden als besser erwiesen.

Es gibt ein paar Schritte, die das dPCR-System zum Laufen bringen. Diese sind wichtig, um die Funktionalität des Systems erfolgreich anzuwenden und die gewünschten quantitativen Ergebnisse bei der Projektanalyse zu erhalten.

Im Handel erhältliche dPCR-Systeme sind zertifiziert, und Sie können sich bei zuverlässigen Quellen erkundigen, welche davon am besten geeignet sind. Die PCR-Verfahren dienen dem Nachweis und der Quantifizierung spezifischer Nukleinsäurekomponenten in klinischen Proben aus jedem Labor.

dPCR und qPCR haben ihre Unterschiede, und es ist ziemlich faszinierend, wie sie Ergebnisse aus den an den Systemen beteiligten Reaktionsprozessen liefern. Der Ansatz, den dPCR verfolgt, bezieht sich auf die Quantifizierung der DNA-Molekülzahlen in einer bestimmten Probe während der experimentellen Analyse.

Die DNA-Amplifikationsreaktion ist in den Fluoreszenzfarbstoffen der qPCR enthalten, aber die dPCR hat Tausende von Unterteilungen spezifischer unabhängiger Teile. Ihre Aufteilung in Abschnitte kann durch Kapillaren oder sogar Mikrotiterplatten mit einzelnen Reaktionsmischungen mit einzelnen Molekülen gesehen werden.

dPCR-Anwendungen in der klinischen Mikrobiologie

Die dPCR scheint im Mittelpunkt der klinischen mikrobiologischen Tests zu stehen, wobei die Reaktionen wiederholt ausgenutzt werden, um präzise Ergebnisse zu erzielen. Die Standards für die absolute Quantifizierung von dPCR basieren auf einer hohen Standardkalibrierung und einer effizienten Amplifikation des gesamten Prozesses.

Die hochwertigen Systeme eignen sich perfekt für die Bestimmung von Belastungen eines bestimmten Krankheitserregers, die Quantifizierung von Targets mit Diversität in ihren Sequenzen und Proben mit Inhibitoren. Der Einsatz digitaler PCR hat es auch ermöglicht, die Kopienzahl von RNA- und DNA-Viren, Parasiten und sogar Bakterien in fast allen klinischen Proben zu bestimmen.

Mutationen sind ein wichtiger Bereich bei der Anwendung von dPCR durch ihre Nachweisfähigkeiten mit Wildtyp-Sequenzen während des Prozesses. Die Detektionsleistungen mit qPCR sind nicht mit dPCR zu vergleichen, da qPCR nachweislich nur bis zu maximal 10 % eines mutierten Allels detektiert. Auf der anderen Seite ist dPCR viel besser als der Nachweis von Mutanten in Tausenden von Wildtyp-KRAS-Genen.

Überlegungen zur Implementierung

Es ist wichtig, zunächst zu überlegen, was eine dPCR-Implementierung wahrscheinlich macht und in welchem ​​Umfeld am besten durchgeführt wird. Es zeigt sich nun, dass die dPCR im Vergleich zur qPCR spezifischere Vorteile hat, so dass eine Implementierung der dPCR in den Labors wahrscheinlich ist.

Implementierungsverfahren sollten auch Situationen berücksichtigen, in denen klar ist, dass die Leistung von dPCR besser ist als die von qPCR. Ein hochpräzises Verfahren zur Messung der Viruslast ist wichtig, um Ergebnisse zu erzielen, bei denen sich jemand sicher sein kann, und sie nicht mit anderen Werten zu verwechseln, was die gesamte Integrität der gesamten Kettenreaktion beeinträchtigen würde.

Die hohe Leistung wird auch verwendet, um Konsensus-Targets durch Verwendung von Konsensus-Primern zu amplifizieren, Probentests mit Inhibitoren, unter anderem, um präzisere und genauere Ergebnisse zu liefern. Es wird immer empfohlen, dPCR als Charakterisierungsstandards für die qPCR-Assays zu verwenden. Stilla Technologies ist eines der aktuellen Unternehmen, das den Einsatz dieser Technologie auf die nächste Stufe hebt.

Die Weiterentwicklung der digitalen PCR-Technologie ist eine perfekte Wahl aus ihren vielfältigen Anwendungen in der klinischen Mikrobiologie. Es hat seinen gerechten Anteil an minimalen Nachteilen. Die damit verbundene Komplexität und die üblichen präzisen Reaktionen verleihen ihm alle Vorteile und die höhere Leistung, die derzeit kein System übertreffen kann.

Mit dem Fortschritt der klinischen Technologie werden die Grenzen mit neu entwickelten Instrumenten beseitigt, um die gesamte klinische Industrie zu revolutionieren. Momentan ist klar, dass der Einsatz von dPCR-Systemen in mikrobiologischen Diagnostiklabors weltweit die Norm sein wird.

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